ALMA-CleanUp: Набор для эстракции ДНК из агарозного геля и очистки из реакционной смеси

Набор предназначен для быстрой и эффективной очистки фрагментов ДНК из агарозного геля, ферментативных смесей – ПЦР, рестрикции и т.д. Фрагменты ДНК избирательно сорбируются на фильтре спин-колонки, промываются этанол-содержащим буфером и элюируются низкосолевым буфером. На одной колонке возможна очистка до 25 микро-граммов ДНК.

Формат
Кат.  номер
Цена, руб.
50 выделенийB0052 700
250 выделенийB00611 500

Применения:

· Экстракция ДНК из ферментативных смесей
· Выделение ДНК из агарозного геля
· Очистка ДНК после ПЦР

Свойства:

· Сорбция ДНК осуществляется на фильтрах спин-колонок
· ДНК может быть использована для секвенирования, клонирования и в других ферментативных реакциях
· Фрагменты ДНК от 100 до 10,000 пнт
· Емкость колонок по ДНК до 25 микро-граммов
· 12 образцов за 15 минут
· Объем элюирующего буфера 25-50 микро-литров

Руководство к пользованию:

Набор предназначен для очистки ДНК размером до 15 Кб из агарозного геля и реакционных смесей (напр. ПЦР, реакции рестрикции и т.д.)

Состав Набора: 

Компонент:
 B005
B006 
Спин-колонки50250
2-мл пробирки для сбора элюата50250
1.5-мл пробирки без крышек для элюции ДНК50250
Буфер для сорбции ДНК30 мл150 мл
Раствор для промывки, концентрат8 мл48 мл
Буфер для элюции5 мл25 мл

Перед началом эксперимента:

· Добавьте 50 мл этанола (96-100%) к 8 мл концентрата буфера для промывки.
· TE буфер не рекомендуется для элюции ДНК
· Для всех процедур подойдет настольная центрифуга любого типа (7,000-12,000 об/мин)

Протокол:

1а. Для очистки ДНК из агарозного геля: Вырежьте гель содержащий ДНК и перенесите в 1.5-2.0 мл пробирку. Взвесьте гель и добавьте к нему равный объем Буфера для сорбции, например 100 мкл на 100 мг геля. Буфер должен быть в избытке если точная масса геля не известна. Добавляйтете вдвое больше Буфера для сорбции если экстрагируете ДНК из агарозы с концентрацией более 1.5%.
Инкубируйте на водяной бане (50-65 °C) периодически переворачивая пробирки в течение 5-10 мин или пока гель не растворится.
1б. Для очистки ДНК из реакционной смеси (ПЦР или рестрикционный гидролиз): Добавьте равный объем Буфера для сорбции, перемешайте (вортекс или пипетируйте). Инкубируйте при комнатной температуре 1 мин.
2. Нанесите смесь на фильр спин-колонки и оставьте на 1-2 минуты для уравновешивания температур раствора и колонки.
3. Центрифугируйте в течение 1 мин.
4. Добавьте 500 мкл Раствора для промывки и центрифугируйте 15 секунд. Выбросьте элюат.
5. Повторите шаг 4.
6. Центрифугируйте еще 1 мин чтобы удалить остатки промывочного раствора.
7. Перенесите спин-колонку в пробирку для элюции ДНК. Добавьте 10-50 мкл Буфера для элюции в центральную часть мембраны спин-колонки и инкубируйте 2 мин. Центрифугируйте 1 мин. Перенесите ДНК в новую пробирку и храните при –20 °С.

фрагменты ДНК ALMA-CleanUp

Рис. Фрагменты ДНК различной длины вырезанные из агарозного геля и очищенные с помощью ALMA-CleanUp

Возможные проблемы: 

Низкий выход ДНК
Фрагменты ДНК меньше 0.1 кб и больше 10 кб выделяются с меньшим выходом
Низкий выход ДНКУвеличить время инкубации с Буфером для элюции
Низкий выход ДНКПодогреть спин-колонку и Буфер для элюции перед использованием при 50-60 °C
Гель растворяется с трудомДобавьте больше Буфера для сорбции

Яндекс.Метрика